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細(xì)胞培養(yǎng)基的檢測方法有哪幾種

更新日期: 2022-06-29
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  現(xiàn)代生物技術(shù)均通過細(xì)胞作為載體來進(jìn)行,無論是基因治療、干細(xì)胞、克隆技術(shù)都在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行的。細(xì)胞的生長需要一定的營養(yǎng)環(huán)境,用于維持細(xì)胞生長的營養(yǎng)基質(zhì)稱為培養(yǎng)基,即指所有用于各種目的的體外培養(yǎng)、保存細(xì)胞用的物質(zhì),就其本意上講為人工模擬體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境,使細(xì)胞在此環(huán)境中有生長和繁殖的能力。它是提供細(xì)胞營養(yǎng)和促進(jìn)細(xì)胞生長增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。細(xì)胞培養(yǎng)基其組成成分主要有:水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)離子及其他一些入核酸降解物、激素等。
 
  細(xì)胞培養(yǎng)基的檢測方法
 
  1澄清度
 
  水是細(xì)胞培養(yǎng)基的溶劑。細(xì)胞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分只有*溶解于水才能被細(xì)胞吸收攝取,細(xì)胞才能生長增殖,因此是否溶解以及培養(yǎng)液是否透明澄清直接影響培養(yǎng)基使用。該項(xiàng)目是通過對水溶解后的細(xì)胞培養(yǎng)基的澄清度檢查,判斷澄清度。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅨB進(jìn)行。
 
  2 pH值
 
  哺乳類動(dòng)物細(xì)胞生長需要合適的酸堿度,pH過高或者過低都會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。pH值的測定也可以檢查細(xì)胞培養(yǎng)基的批間差。清大天一標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定取規(guī)定量供試品,用注射用水(水溫20℃-30℃)溶解至1L,加入規(guī)定量碳酸氫鈉到上述溶液中,用與細(xì)胞培養(yǎng)基溶液pH值相近的兩點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)緩沖液校準(zhǔn)后的酸度計(jì)進(jìn)行測定。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅥH進(jìn)行;加入規(guī)定量的碳酸氫鈉到上述溶液中,按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅥH進(jìn)行
 
  3.干燥減量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)
 
  細(xì)胞培養(yǎng)基具有吸濕性,在空氣中放置水分會(huì)很快升高,干燥減量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示產(chǎn)品中含濕量。細(xì)胞培養(yǎng)基是有菌制劑,其豐富的營養(yǎng)成分有利于微生物生長,控制細(xì)胞培養(yǎng)基中的水分可以防止微生物的繁殖,保持細(xì)胞培養(yǎng)基的養(yǎng)分。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅧL干燥失重測定法進(jìn)行。
 
  4.滲透壓
 
  溶劑通過半透膜由低濃度向高濃度溶液擴(kuò)散的現(xiàn)象稱為滲透,阻止?jié)B透所需施加的壓力,稱為滲透壓。細(xì)胞必須生活在等滲環(huán)境中,動(dòng)物細(xì)胞借助K+、Na+維持滲透平衡。大多數(shù)細(xì)胞對滲透壓有一定的耐受性。但是培養(yǎng)液滲透壓過高容易使細(xì)胞脫水萎suo,培養(yǎng)液滲透壓過低容易使細(xì)胞膨脹破裂,因此要控制培養(yǎng)基的滲透壓范圍。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅨG滲透壓摩爾濃度測定法進(jìn)行。
 
  5細(xì)菌內(nèi)毒素
 
  細(xì)菌內(nèi)毒素是許多病原性細(xì)菌所產(chǎn)生的毒素。它的特殊性在于不是細(xì)菌或細(xì)菌的代謝產(chǎn)物,而是細(xì)菌死亡或解體后才釋放出來的一種具有生物活性的物質(zhì)。培養(yǎng)基細(xì)菌內(nèi)毒素過高,對生物制品疫苗(如狂犬、乙肝疫苗)、基因工程藥品等注射用的藥品都需要檢查細(xì)菌內(nèi)毒素。因此本項(xiàng)目的檢驗(yàn)符合生物制品質(zhì)量控制要求。常規(guī)細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)定為<10 EU/ml。稱取本品規(guī)定量(見表4-12)的1/100,加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水10 mL溶解,吸取該溶液0.1 mL加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水3.9 mL,混勻即得試樣。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅪE細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法中的凝膠法進(jìn)行。
 
  6微生物限度
 
  細(xì)胞培養(yǎng)基不是無菌產(chǎn)品,其中的微生物在一定條件下會(huì)吸收細(xì)胞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)滋生繁殖,導(dǎo)致變質(zhì)失效??刂萍?xì)胞培養(yǎng)基中細(xì)菌和霉菌,是延長細(xì)胞培養(yǎng)基有效期的方法之一。清大天一在參考《中華人民共和國藥典》2005版二部附錄第100頁的口服給藥制劑的微生物限度標(biāo)準(zhǔn),并嚴(yán)于該標(biāo)準(zhǔn),規(guī)定細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品的細(xì)菌數(shù)每1g不得超過200個(gè),霉菌數(shù)每1g不得超過50個(gè)。
 
  稱取樣品1 g,加入無菌純化水10 mL溶解,混勻即得試樣。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅪJ微生物限度檢查法進(jìn)行,檢查項(xiàng)目為細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)。檢查法采用平皿法。
 
  7細(xì)胞生長試驗(yàn)
 
  這是一個(gè)性能特性表述的要求。功能就是培養(yǎng)哺乳類動(dòng)物細(xì)胞,因此經(jīng)過細(xì)胞培養(yǎng)效果的檢驗(yàn)是產(chǎn)品質(zhì)量優(yōu)劣的直觀表述,這也是很多生物制藥用戶要求的一項(xiàng)指標(biāo)。目前國內(nèi)尚無細(xì)胞培養(yǎng)和計(jì)數(shù)的法定方法,可參考《體外培養(yǎng)的原理與技術(shù)》中細(xì)胞計(jì)數(shù)fa論述的內(nèi)容給出。按產(chǎn)品說明書配制培養(yǎng)液進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),前四天用含10%小牛血清的培養(yǎng)液培養(yǎng),觀察細(xì)胞形態(tài)并計(jì)數(shù),檢查細(xì)胞培養(yǎng)基是否有促生長的能力。后三天用不含小牛血清的培養(yǎng)液維持培養(yǎng),觀察細(xì)胞形態(tài)并計(jì)數(shù),檢查細(xì)胞培養(yǎng)基中是否有不利細(xì)胞生長的毒素。
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